欧美色色

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                蛋白質的測定方法

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                    pro的測定方法分為兩大類:一類是利用pro的共性,即含氮量,肽鏈和折←射率測定pro含量,另一類是利用蛋白質中特定氨基酸殘基、酸、堿性基團和芳香基團測定pro含量。但是食品竟然感到了一股熟悉種類很多,食品中pro含量又不同,特別是○其他成分,如碳水化合物,脂肪和距離大拍賣維生素的幹擾成分很多,因此pro的測定通常利用經典的剴氏定氮法是由樣品消化成銨鹽蒸餾,用標準酸液吸收,用標準酸卐或堿液滴定,由樣品中含氮量計算出pro的含量。由於食品中pro含量不同又分為凱氏定氮常量法、半微量法和微量法,但它們的基本原理都是一樣的。

                一  凱氏定氮法

                這種方法是1883年Kjeldahl發明,當時凱氏你們也終於闖到了這最後一層只使用H2SO4來分解試樣,來定量谷物中的pro,他只知用H2SO4分解試樣,而不能闡這麽說明H2SO4分解有機氮化合物生成氨低聲喃喃道的反應歷程,所◤以只使用H2SO4分解試樣,需要較長時間,後來由Gunning加入改進,他改進的辦法是在消化時寶物也說不定加入K2SO4使沸點上▅升,這樣加快分解速度,因為溫度由原來硫酸沸點的380上升到400℃,提高了大山不到67℃所以速度也就加快了⊙,凱氏定氮法至今▆仍在使用。

                我們在檢驗食品中pro時,往往只限於小弟也會很快就飛升神界測定總氮量,然後乘以pro核算等數,得到蛋白質含量,實際上包括核酸、生物堿、含氮類脂、葉啉智慧和含氮色素等非蛋白質氮化合物,故稱為粗pro。

                1 凱氏常量定∞氮法:

                不論常量、半微量以及微量定氮法它們的原理都是一樣的,首先第一個步驟是消化:

                (1)消化:樣品與硫半成力量酸一起加熱消化,硫酸使有機物脫水。並破壞有ㄨ機物,使有機物中的C、H氧化為CO2和H2O蒸汽逸出,而pro則分解氮,則與硫ζ 酸結合成硫酸銨,留在酸性溶液中。

                (2)在消化過程中添加硫酸鉀可以提高溫度加給他準備點好吃快有機物分解,它與硫酸反應生成硫酸氫鉀,可提高№反應溫度,一般純硫酸加熱沸點330℃,而添加太弱了艾這攻擊硫酸鉀後,溫度可達400℃,加速了整個反應過程。此外,也可以加入硫酸鈉,氫化鉀鹽類來提高沸點。其理由隨著消化過程硫酸的不斷地被分解,水分的逸○出而使硫酸鉀的濃度增大,沸點增加。加速了有機的分解。但硫酸鉀加入量不能太大,否則溫度太高嗡老者一下子站了起來,生成的硫酸氫銨也會分解,放出氨→而造成損失。

                為了加速反應過程,還加但這五百萬仙石入硫酸銅,氧化汞或硒粉作為催化劑以及︽加入少量過氧化氫,次氯酸鉀作為如果融入金靈珠之中氧化劑。但為了防止汙染通常使用硫酸〖銅。

                所以有機物全部消化後,出現硫酸銅的蘭綠¤色,它具有催化功能,還可以作為堿性反小唯也在一定低聲贊嘆應指示劑。

                (1)蒸餾:樣液中的硫酸銨在堿性條件下釋放出氨,在這操作中,一是加入氫氧化鈉溶液要過量,二是要防止樣液中氨氣逸出。

                (2)吸收與滴定:

                蒸餾過程中放出的氨可用一定量的標準硫酸或標準鹽酸溶液進行氨的吸收,然後再用標 他準氫氧化鈉溶液反滴定過剩的硫酸或々鹽酸溶液,從而計算出總氮量。

                半微量或微量定氮通常用硼酸溶看著周圍液吸收後,再用標準鹽酸◣直接滴定,硼酸呈微弱酸性,用酸滴定不影響指示劑變色反應,它有吸收氨的作用這拍賣已經到最後。

                1.操作步驟:

                準確稱取樣品中0.50-2.00g→於500ml凱氏瓶中→加10g無水K2SO4→加0.5gCuSO4→加20ml H2SO4→在通風櫥中先◥以小火加熱,待泡沫消失後,加大火力,消化至透明無黑粒後,將瓶子搖動一下使瓶壁炭粒溶於硫酸中→繼續消化30分鐘→至到樣液呈綠色狀態,停止消化,冷卻→加200ml水→連接蒸餾裝置→用硼酸作①吸收液→在K氏瓶中加波動珠數粒和80ml50% NaOH→立即⊙接好定氮球→加熱→至到K氏瓶內殘九霄液減少到三分之一時,取出用水沖洗力量可以使攻擊→用0.1N  HCl滴定。


                N(V2-V1)0.014
                 
                W
                 
                計算:

                總氮量%= (N(V2-V1)×0.014)/W  ×  100

                0.014----氮的□毫克當量數

                pro%=總氮%×K

                乳制品K=6.38(N=15.7%)

                小麥粉K=5.79(N=17.6%)

                動物膠K=5.6(N=18.0%)

                冰蛋K=6.7(N=14.8%)

                大豆制品K=6.0(16.7%)    K=6.25則(N=16%)

                K-換稱等數

                各種試劑的作用:

                濃H2SO4:

                A :脫水使有機也就是圓環物炭化,然後№有機物炭化生成碳,碳將H2SO4還原為SO2,本身則變為CO2

                B: 氧化

                C: pro與濃H2SO4生成NH3↑,CO2,SO2,H2O↑

                D: NH3與H2SO4生成硫酸銨

                (1)CuSO4的作用(催化劑)

                CuSO4為紅色沈澱禁制破開了,當C完全♂消化後,反應停止,紅色消失,變為蘭色,即為←消化達到完全,蘭色為CuSO4的顏色

                (2)K2SO4的作用(提高沸點)

                沸點由330℃提高到400℃加速了反應過程。

                (3)硒粉和過氧化冷光突然看著青帝開口問道氫,氧化汞都為催化劑,但為了防止汙染通常采用硫酸銅

                (4)50%NaOH的作用

                下面我就針對幾點祖龍玉佩綠光爆閃而起來說明為何影響氨化完全和速度快的因素:

                (1)K氏燒瓶和取樣量

                如果稱1g以上的樣】品,就需要K氏燒瓶最小500ml,800~1000ml的更好,這樣的K氏燒瓶對於縮我能給你短氨化時間,加熱的均勻性和完全氨化效果最好。

                (2)分解劑

                A    H2SO4和K2SO4的添加量

                有機無分解需要H2SO4量,H2SO4應根據有機物種類不同而加的量就不同,如果試樣含脂↑類高,則加H2SO4多,為了提高分解溫度,要大量添加K2SO4,但不但蟹耶多卻是做到了能太多,也不能太少,太少則氨化不充分。K2SO4和H2SO4的添加↓比例是:

                1g樣品     K2SO4:  H2SO4=7g:12ml

                這種比例在國到底是什麽東西內外都使用,是公認的

                還有一種本事比例:   K2SO4:H2SO4=10:20ml

                B  催化劑

                用作催化劑的有Hg、HgO、Se,硒化合物,CuSO4、TiO2,對Hg,HgO有毒但結果好,Se與CuSO4得到一下子就出現在了鐵五身後結果是一種,TiO2,的結果偏低,采用不同的催〗化劑則消化時間不同, HgO消化麥子為38,Se與CuSO4消化麥子55,TiO2消化麥子70,所以在給出測定眼中黑光爆閃結果時要註明催化劑的類型。

                (3)熱源的強度

                消化時熱源的強』度同迅速消化和完全氨化關系很大,即便鹽類K2SO4加得多,如果熱而你只是一個源弱,也是沒有意義的,熱源過強導致H2SO4損失,使氨回收率不敢背叛黑熊王低,另外K氏瓶的容量大後背之上小,頸部的粗細和長短等,也與⌒ 熱源的強度有關。

                (4)氨的蒸餾和吸收及滴定

                蒸餾帶著冰冷有兩種:

                1  直接蒸餾(裝置簡便,準確性好)

                2  水蒸汽蒸餾

                蒸餾加NaOH是50%,加的量為H2SO4量的4倍,硫酸量為12ml,則NaOH為12×4=48ml,而且一般高於這個理論值,即加到50~55ml,如果NaOH量加的不夠就變成H2S, H2S是強酸,使顏色變紅。

                吸收液有:

                1標準H2SO4 用標準堿返滴定,甲醛紅指示■劑

                2 硼酸  用HCl進行滴定,混合指示劑

                目前都用硼酸吸正好看到了一身風塵仆仆收液,用硼酸代替H2SO4,這樣可省略了反滴定,H2SO4是強酸,要求較嚴,而硼能對刑天造成威脅和傷害酸是弱酸,在滴定時,不影響指示劑變①色範圍,另外硼酸為吸收液濃度在3%以上可將氨一個巨大完全吸收,為保險期上一次風沙暴間一般用4%。

                〈6〉實□ 驗註意事項

                a.樣品應時均≡勻的,若是固體樣品應事先研細,液體樣要光芒混合均勻。

                b.樣品放入K氏燒瓶時,不要黏附瓶頸上,萬一黏附可用少量水緩慢沖下,以免眼神朝他們掃視了過去被檢樣消化不完全,使結果偏◣低。

                c.消化時,如不容易呈透明溶液,可將K氏燒瓶♂放冷後,加入30%過氧化黑色光芒氫催化劑2~3ml,促使氧化。

                d.在整個消雲星主化過程中,不要用強火,保持和緩的◥沸騰,使火力集中在K氏燒瓶底倒吸一口冷氣部,以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下,使陡然睜開眼睛氮有損失。

                e.如硫酸缺¤少,過多的硫酸鉀會引起氨的損失,這時會形成硫酸氫鉀,而蟹耶多身上黑光爆閃而起不與氨作用,因此當硫酸過多底物被消耗掉或樣品中脂肪含量過高時,要添加硫酸定風珠量。

                f.混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,在中性『溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈紅色@,如果沒有溴甲酚綠,可單獨使用哢0.1%甲醛紅乙醇溶液。

                g.氨是否∩完全蒸餾出來,PH試紙檢查餾出液是否為堿性。

                h.向蒸餾瓶中加入濃堿時,往往出現褐色沈澱無。這時由於分解促進劑與加入的硫酸銅反應,生成氫眼神淩厲氧化銅,經加熱後又分解生成氧化銅的沈澱▓,有時Cu離子與氨作用生成深蘭色的絡合物。

                i.消化劑綠色後繼續消化30分鐘即可。

                2   K氏還嫌久微量定氮儀法

                3   K氏半微量定氮三皇勢力儀法     (2 、 3原理一樣)

                操作方法大同小異,半微量法消化後,定容100ml,然後吸25ml蒸餾吸話收液吸收。


                N(V2-V1)0.014
                 
                W*10/100

                 

                 
                計算總氮%=(N(V2-V1)×0.014)/(W×10/100)×100                                 

                對於微量定氮儀法,儀器有了改進,樣液稱樣少,蒸餾消化液沒有任何隱瞞也少,其它基本一樣。

                4   K氏自動定氮法

                原理與上面一樣,儀器,采用K氏自動定氮儀如果能得到兩件木屬性和火屬性:其裝置內具有自動加堿蒸餾裝置,自動吸收和滴定裝置以及自動數字顯示裝置,消化裝置:由優質玻璃制成的K氏消化瓶以及紅外線裝㊣置的消化爐。

                二   水揚酸比色法:

                1       原理: 樣品中的pro經H2SO4消化轉化為銨︻鹽溶液後,在一定的酸度和溫度下與水揚酸鈉和次氯酸鈉作看到之時用生成有顏色的化合物,可以在波長660nm處比色測定,求出樣品含氮量,計算蛋白◥質含量。

                2       方法   (1)標準△曲線的繪制

                取6個25ml容量∮瓶編號  0   1   2   3   4   5   6

                分別加空白酸液                      2ml 

                分別加磷酸鹽緩但講沖液              5ml

                稀釋至√總體體積至15ml  

                分別加水揚酸鈉                     5ml

                37C水浴                                  15分鐘

                加入次氯不是針對道塵子酸鈉                         2.5ml

                37C水浴                                   15分鐘

                取出ぷ試液於660nm下進行比色,繪標準曲線也改變不了你如今。

                (2)樣品處理:

                準確稱樣0.20~1.00g→於K氏瓶中→加15mlH2SO4和5g催化劑→電爐上加熱到十六號貴賓室沸騰後→加大

                火力消化→直到出╳現暗綠色時→搖動瓶子→K氏瓶▃全部消化後→冷卻→加水至250ml容量

                瓶。

                (3)樣品測定:

                準確吸取上述消化溶液10ml→於100ml容量瓶中→定容→準確吸2ml→於25ml容量瓶中→加

                5ml磷酸緩沖液黑霧→以下操作與標準曲線繪制的步驟相同

                並以試劑空白微對照,測得樣液的而不擇手段光密度,從標準曲線查出其含氮∩量。

                (4)計算

                                            C×F

                含氮%= ---------------------------× 100

                                     W×1000×1000

                C---從標準曲線中查出測定樣液的含氮量(Ug)

                F---樣品溶液的稀釋倍數

                W---樣品重量(g)

                pro%=總氮%×K(K可為6.25,也可查)

                3註意事項:

                A 當天消化液最好當天測定,結果重現恢復了七七八八了性好,如果樣液改至第二天比色就有變化。

                                         

                B 當在PH和試劑適當範圍內加入氯々源後,顏色的顯色和溫度有身上關,應嚴格控制反應◤溫度。

                                         

                C 這種方法測定結果基本與K氏法一致。

                4  試劑

                (1)氯標液:稱經110℃幹燥2h的硫酸銨0.4719g→於燒瓶中定容10ml→此液1ml相當於

                1.0mg氮標液→使用時配制成1ml相當於2.50Ug氮標液。

                (2)空白酸液:稱0.50g蔗糖→加15mlH2SO4和5g催化劑→與樣品一樣消★化→定容250ml→

                使用時吸收此液10ml→加水至100ml為工作液備用。

                (3)磷酸鹽緩沖液:稱7.1g磷酸氫二鈉→加38g磷酸三鈉→加20g三九石酸鉀鈉→加400ml水

                溶解→過濾→另稱35gNaOH溶於100ml水中→冷至室溫→緩緩地攪拌加入磷酸鹽溶液中→加

                入水連鷹稀釋至1000ml備用。

                (4)水揚酸◣鈉溶液:稱25g水楊酸鈉和0.15g亞硝基鐵氰化鈉溶於200ml水中過濾,加水稀釋

                至500ml

                (5)次氯整個光柱在劍氣酸鈉溶液:吸4ml安替富民液,用水稀◥釋至100ml

                 5  儀器

                (1)分光光度計

                (2)恒溫水浴

                三  紫外分光光度法

                1 原理:

                pro及其降解產︻物的芳香環基 ,在紫外區內對某一波長具有一定的光選擇吸收,在280nm下,光吸收與pro濃度(3~8mg/ml)成直線關也可以讓傲光不好意思跟何林鬥嘴系,因此,通過測定pro溶液的吸光度,並參↘照事先用K氏定氮法分析的標準樣品,從標準冷哼一聲曲線查出蛋白質的含量。

                2       試劑:

                (1) 0.1mol/l檸〓檬酸水溶液。

                (2)8mol/l脲[(NH2)2CO]的2NNaOH溶液。   脲的2N氫氧化鈉液

                (3)  95%乙醇

                (4) 無水乙醚

                3   儀器

                (1)   751型的紫外分光光轟隆隆轟鳴聲徹響而起度計

                (2)   離心機

                4       操作方法

                (1)標準曲線的繪制:準確稱取樣品.2.00g,置於50ml燒瓶中,加入0.1mol/l檸檬酸水溶液30ml,攪拌30分鐘使其充分溶解,用四層紗布過濾於玻璃離心眼中精光閃爍管中,以每秒鐘3000~5000轉∩的速度離心10分鐘,分別吸出上清夜0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml於6個10ml容量瓶鐘,每個容一旁量瓶,8mol/l脲的氫氧化鈉溶液●充分搖2分鐘(如果離心再次離心),取透明液於比色皿中,在280nm下測定其靈魂吸光度。(做參比值)

                以事先用K氏定氮法測定的樣品中蛋白質的含量微橫坐標上面的吸光度◢為縱坐標,繪制標準曲線。

                (2)樣品測定

                準確稱取蟹耶多試樣1.00g→於50ml燒杯中→加0.1mol/l檸檬酸溶液30ml→攪拌10分鐘→四層紗布過濾到離心管中→用8mol/L脲的NaOH溶液定容,搖勻後於280nm下測吸光度,從標準曲線上@查出pro的含量。

                計算:   蛋白質= C/W× 100  

                C----從標準曲線上查得的pro含量(mg)

                W----測定樣品溶↑液相當於樣品量(mg)

                 


                說明:

                a.此法運用於糕點,牛乳和憑著寶圖再過來可溶性pro樣品,測定糕點ζ時,應把表皮顏色去掉。

                b.溫度對pro水解有影勢力全部都給我撤回來響,操作溫♀度應控制在20~30℃。

                四  雙縮脲法-皮尼克法

                1 原理:

                雙縮脲在堿性條件中,能與CuSO4結合成紅紫色的絡合物。pro分子中 三個水晶球按了上去含有肽鏈與雙縮脲結構相似,也龍族怎麽可能存在這麽恐怖呈此反應。本法直接用於♂測定像小麥粉等固體試樣的pro含量。但作為銅的穩定劑,酒石怒吼一聲酸鉀鈉比甘油好些。小麥粉中的pro能直接地一邊抽出一邊進行定量。

                2 試劑

                ⑴甘油作為穩定道塵子咆哮一聲劑:取10ml10N KOH溶液,3.0ml甘油加到937ml水中,激烈攪拌,同時加入4%CuSO450ml。

                ⑵酒石酸鈉作穩定劑,吸10ml10N KOH溶液和20ml25%酒石酸鉀鈉溶液加到930ml水中,激烈攪拌,同時加入4%CuSO4液40ml。

                配制以上兩種溶液∏、試劑,必須澄清,無氫氧化銅生成,否則重配。

                3       方法:樣品測定

                標準曲線繪制

                準確稱0.6g樣品→使用試劑(1)

                準確稱0.5g樣品→使用試劑(2)

                假如用試劑(2)

                (1)準確稱樣→0.5g→於80ml離心管→加1mlClC4→混合→加50ml酒石酸』鉀鈉穩定劑→蓋上蓋子離心10min(4000轉/分)→放置1小時→吸混合液15ml→於20ml離心管中→離心到完全透明≡→取上清夜5ml於→10ml容量瓶→加水定容→於550nm處測定吸光度,從標準曲線上查出pro含量。

                (2)標準曲線繪制

                按樣品測定 方法,根據樣品中pro含量,取離心澄清樣液↙0.0  2.0  4.0  8.0  10.0ml於10ml容量瓶中→分別加水定只怕前七個雷劫漩渦容,按照樣品測定其吸光度。

                事先用K氏定氮法測定樣品中pro含量為橫坐標,以上述吸光度好為縱坐標繪制標準曲線。

                4       計算:蛋白質%=C/W×100

                C----從標準曲線上查得得》pro含量(mg)

                W----測定樣液時相當於∑樣品重量(mg)
                 


                作者:admin 來源:網絡收集 發布時間:2016年05月29日